Трансформація злоякісна за допомогою ДНК пухлин.

Докази багатоступінчастої природи раку були отримані в експериментах по штучному введенню онкогенів в клітини. Якщо один онкоген переноситься в культуру фібробластів хом’яка, змін у зростанні клітин не спостерігається. Якщо ж одночасно переносять два онкогена, трансформовані клітини ростуть ненормально швидко і при трансплантації миші викликають пухлини. Більш того, не всі комбінації онкогенів здатні трансформувати клітини. Онкогени можна класифікувати по здатності комплементіровать один одного в трансформаційному аналізі. З цих дослідів ми можемо укласти, що клітини виробили кілька шляхів контролю росту і перш, ніж клітка вийде з під контролю, більш ніж один з них повинен бути пошкоджений.

На початку 80-х років були отримані оригінальні і принципово важливі за значенням дані про перенесення злоякісного фенотипу від пухлинних клітин до нормальних за допомогою ДНК з трансформованих клітин (Shih C. et al., 1979, Shih C. et al., 1981). Фактично з’явилося перше прямий доказ того, що ознаки трансформації закодовані в ДНК.

Була виділена ДНК з клітин карциноми сечового міхура людини і шляхом трансфекції введена в лінію мишачих клітин NIH 3Т3. Ця лінія є псевдонормального. Вона здатна до необмеженого числа поділів in vitro і, отже, пройшла перший етап малігнізації, але не володіє іншими ознаками трансформованого фенотипу, такими, як морфологічні зміни, зменшення потреби в ростових факторах, відсутність контактного гальмування (здатність до багатошарового зростанню), незалежність зростання від прикріплення до субстрату, прівіваемость (здатність утворювати пухлини у сінгенних тварин).

Про здатність ДНК з клітин карциноми викликати злоякісну трансформацію судили по появі в культурі трансфецірованних NIH 3T3 клітин багатошарових фокусів морфологічної трансформації. Виявилося, що ця ознака можна було передавати не тільки шляхом первинної трансфекції клітин за допомогою ДНК пухлинних клітин, але і при повторних циклах трансфекції за допомогою ДНК, виділеної з клітин первинних трансформантів (з клонів з багатошаровим зростанням) (Shih C. et al., 1981). Гібрідізаціонний аналіз показав присутність ДНК людини у вторинних і наступних трансформантів (Parada LF et al., 1982).

Використання в якості зондів послідовностей різних v-onc, а також c-Ha-ras1 щури дозволило встановити гомологію трансформирующего гена з карциноми сечового міхура людини з генами v-Ha-ras і с-Ha-ras1 щури (Parada LF et al., 1982 ). Секвенування цього гена і порівняння його структури з протоонкогенів з-Ha-ras, виділеному з нормальних клітин людини, показало, що він відрізняється від свого нормального алелі заміною всього лише однієї підстави в 12-му кодоні, що приводить до заміни в кодованого геном поліпептидного ланцюга гліцину на валін (Tabin CJ et al., 1982).

Подальші дослідження за допомогою методу трансфекції ДНК показали, що успішний перенос трансформованого фенотипу може бути здійснений за допомогою ДНК з різних пухлин різного видового походження, що виникають спонтанно і індукованих канцерогенами (Cooper GM et al., 1980, Krontiris TG, Cooper GM, 1981, Perucho M. et al., 1981).

Метод перенесення ДНК дозволив виявити в клітинах нейробластоми людини невідомий раніше ген N-ras (Shimisu K. et al., 1983). Необхідно відзначити, що в переважній більшості випадків даним методом виявлені гени, що належать до ras-сімейству: c-Ha-ras1, c-Ki-ras2 і N-ras (Barbacid M., 1987). Інші гени за допомогою такого підходу тестувалися вкрай рідко. Тим не менше було виявлено кілька нових онкогенів: c-erb2, trk, c-met, hst, dbl (Marshall CJ, 1989).

Незважаючи на те, що метод переносу ДНК не виявив великої кількості нових онкогенів, він продемонстрував значну роль активованих клітинних онкогенів ras-сімейства у формуванні пухлин людини. Їхня присутність у 10-30% пухлин визначило інтерес до даної групи генів в 80-ті – 90-ті роки.

Comments are closed.