Статева приналежність Y-хроматину. Приготування препаратів для визначення статі по Y-хроматину.

Наведена вище методика заснована на виявленні Х-хроматину – цитогенетичного ознаки жіночої статі і тому ефективна для встановлення статевої приналежності клітин від осіб жіночої статі. Висновок про походження клітин від осіб чоловічої статі робилося на підставі відсутності Х-хроматину в усіх досліджених клітинах. У слідах крові при цьому необхідно було досліджувати не менше 120 нейтрофілоцітов. При обмеженому матеріалі це знижувало вірогідність діагностики статі.
Тому не випадковий був інтерес, проявлений судовими медиками до відкриття Y-хроматііа – цитогенетичного ознаки чоловічої статі.

Дослідженням експериментальних слідів крові на текстильних тканинах, що зберігалися від однієї доби до 3 років, і в слідах на різних речових доказах давністю від 3 місяців до 4 років встановлено, що в ядрах лейкоцитів, витягнутих з цих слідів, Y-хроматин зберігається, але частота його нижче, ніж в мазках свежевзятой крові (Любінська С. І., Антонова С. Н., 1975).

Середня частота Y-хроматину у лімфоцитах 52%, що на 30% нижче, ніж в мазках крові; в нейтрофілоцітах 22%, тобто нижче, ніж в мазках крові, на 66%. Разом з тим порівняльні дані про частоту Y-хроматину у лімфоцитах свіжих мазків і слідів крові різної давнини, отриманих від одних і тих же осіб, а також результати проведених експертиз показали, що немає прямої залежності між падінням частоти Y-хроматину і давністю сліду крові .

Встановлено, що зниження частоти Y-хроматину пов’язано зі зміною ядер в період утворення сліду, яке залежить від зовнішніх чинників, що уповільнюють висихання крові на предмет-носії.
хроматин

В епітеліальних клітинах в слідах слини, а також зовнішнього кореневого піхви волосся, вирваних в різний час, добре зберігається Y-хроматин. Відзначено, що він виявляється з меншою частотою, ніж у свіжих зразках (в середньому на 6 – 12%), але зниження частоти відбувається не в кожному випадку і не залежить від давності зберігання зразків.

Препарати з слідів крові, слини і кореневої частини волоса готують так само, як і при дослідженні Х-хроматину. Для отримання більш тонких препаратів необхідно вміст, що витягають із слідів, перенести на предметне скло у вигляді невеликої краплі і розподілити його на площі 1-1,5 см2. Можна також зробити велику краплю (діаметром 1,5 см); в цьому випадку обережно відсмоктують піпеткою частину вмісту з центру краплі і переносять на інше скло.

При підсиханні препарату з краплі видаляють волокна і частки небіологічного походження. Висохлі препарати фіксують від 3 до 10 хв в бюксе зі спиртом (метиловим або 100 ° етиловим). Після фіксації їх можна зберігати невизначено довгий час або відразу пофарбувати для дослідження. Перед фарбуванням препарати змочують дистильованою водою (рН = 7,0), опустивши в бюкс на 1-2 хв. Вологий препарат поміщають в 0,5% водний розчин акрихіну (атебріна і т. п.).

Час оптимальної забарвлення визначають за допомогою контрольних препаратів – мазків чоловічої крові. Свіжоприготований розчин акрихіну забарвлює практично миттєво; в повторно використовуваному розчині препарат тримають до 15 хв. Після промивання в проточній воді його поміщають на 1-2 хв у дистильовану воду і, не підсушуючи, накривають покривним склом. Надлишок води видаляють фільтрувальним папером до тих пір, поки покривне скло буде лежати нерухомо. Товстий шар рідини між стеклами і велика товщина препарату заважають дослідженню, збільшуючи «вуаль» (кількість розсіяного світла, який знижує контрастність зображення).
Щоб препарат не підсох за час дослідження, краю покривного скла можна заплавах парафіном.

Comments are closed.