Мікроскопія для виявлення Y-хроматину. Дослідження препаратів на Y-хроматин.

Препарати вивчають під люмінесцентним мікроскопом. Пошук клітин і ядер виробляють, дотримуючись певний порядок, з об’єктивом 20X, а аналіз їх структури з об’єктивом 90X, попередньо завдавши на покривне скло краплю імерсійного нелюмінесцірующего масла.

В правильно забарвленому препараті тло темний або злегка зеленуватий; цитоплазма клітин бліда, прозора, слабо флюоресцирующая, ядра – яскраво флюоресцирующие жовтувато-зелені. Під імерсійним об’єктивом добре помітна нерівномірна флюоресценція ділянок ядра: одні з них світяться сильніше, інші виглядають темними.
Тельця Y-хроматину виділяються найяскравішою флюоресценцией і чіткими контурами. Грудочки Ф-хроматину, якщо їх видно, є крапки, що світяться.

У препаратах, приготовлених з об’єктів експертизи, завжди є більша або менша кількість змінених непридатних для діагностики ядер. Такими змінами можна вважати відсутність оболонки ядра, частини хроматину, значне послаблення забарвлення і гомогенність хроматину; у нейтрофілоцітов – округлення ядер, втрату ними частини сегментів.

У препаратах, приготовлених з слідів крові на невсмоктуючих рідина предметах-носіях (скло, метал та ін), основною перешкодою для виявлення Y-хроматину є фібрин, який обволікає ядра світиться мережею. Епітеліальні клітини, витягнуті з слідів слини, розташовуються в препаратах ізольовано і групами, що лежать в один, іноді в 2-3 шари.
y-хроматин клітин

Потрібно мати на увазі, що при накладенні однієї клітини на іншу послаблюється контрастність світіння Y-хроматину через інтенсивно світиться фону, утвореного світінням кількох ядер. Тому якщо в препараті багато клітин, то доцільно вивчати тільки ізольовані.

Препарати, виготовлені з волосся, мають свої особливості, які можуть ускладнювати і обмежувати виявлення Y-хроматину. Головна з них – наявність жиру (при недостатньо хорошої знежирення волоса), який покриває клітини світиться плівкою і маскує Y-хроматин. Крім того, при недостатньо ретельному подрібненні кореневого піхви виявлення Y-хроматину неможливо через яскравого загального світіння великих фрагментів епітеліальної тканини.

Виявлення Y-хроматину ускладнюється наявністю мікроорганізмів, волокон та інших включень, через яскравого свічення яких послаблюється зорове сприйняття флюоресценції хроматину, особливо в ядрах, що лежать поруч з такими включеннями. Перешкодою для виявлення Y-хроматину можуть служити мікроорганізми порожнини рота, які в препараті світяться інтенсивно і, потрапляючи на ядро, і іноді імітують Y-хроматин.

Тому кожне ядро ​​необхідно розглядати уважно, переміщаючи його до центру поля зору і виробляючи безперервну фокусування, щоб виявити чітко Y-хроматин і відрізнити від нього сторонні включення.

Слід мати на увазі випадки, коли поряд з чіткою виявленням Y-хроматину у лімфоцитах його не вдається виявити в ядрах нейтрофілоцітов, що не пов’язано з давністю слідів крові. Мабуть, цей факт можна пояснити тим, що нейтрофілоціти відрізняються від лімфоцитів меншою механічної і осмотичної резистентності, а також високою активністю гідролітичних ферментів.

Тому вони більш схильні до несприятливих впливів середовища в період підсихання крові. З цієї причини при діагностиці статі враховують дані, отримані тільки при дослідженні лімфоцитів.

Comments are closed.