Гістологічні зрізи. Техніка виконання гістологічних зрізів.

Якщо на експертизу надходить фіксований матеріал, то приготування препарату роблять так само, як для звичайного гістологічного дослідження. Вирізані з різних ділянок шматочки товщиною не більше 0,5 см після відповідної обробки заливають у парафін і на мікрогоме готують зрізи товщиною 2-3 мкм. Зрізи до фарбування необхідно депарафініровать і обробити розчином трипсину.

Парафін видаляють, поміщаючи предметні скла з наклеєними на них зрізами в ксилол. Потім проводять препарати через батарею спиртів понижающейся концентрації (96%, 70%, 50%) п дистильовану воду.

Розчин трипсину видаляє деяку кількість білків і зменшує фарбування міжклітинної речовини і цитоплазми клітин флюорохромом. Використовують 0,25% розчин трипсину, препарати витримують в ньому 30 хв, а потім на 2-4 с поміщають в 2% розчин оцтової кислоти.

Препарати, виготовлені тим чи іншим способом, фіксують метиловим спиртом (крім гістологічних зрізів), фарбують АЗУР-еозином і флюорохромом так само, як препарати з епітеліальними клітинами волосся і слизової оболонки рота.

З метою діагностики статевої належності тканин їх досліджують спочатку на Y-хроматин, пофарбувавши флюорохромом. Що ж стосується частинок невідомих тканин, то спочатку необхідно вирішити питання про їх органно-тканинному походження. Тому препарати забарвлюють АЗУР-еозином і після вирішення цього питання аналізують ядра на наявність Х-хроматину.
гістологічні зрізи

Доцільно один з препаратів не фарбувати азуреозіном, залишаючи його для аналізу на Y-хроматин. Якщо з частинки вдалося приготувати тільки один препарат і він забарвлений АЗУР-еозином, то для дослідження Y-хроматних необхідно ретельно відмити барвники. Для цього препарат поміщають в 10-25% розчин оцтової кислоти до видалення Азура і промивають проточною водою; еозин видаляють, поміщаючи препарат в 5 – 10% розчин аміаку.
Після другої промивання в проточній воді препарат можна забарвити флюорохромом.

Визначення тканинної приналежності частинок. Орієнтовна визначення типу тканини можливо вже в процесі приготування препаратів, так як під стереомикроскопом видно деякі морфологічні ознаки тканини або органу. Так, твердість частинки, що зберігається при приміщенні її в оцтову кислоту, може свідчити про те, що це кістка або хрящ. Надзвичайна м’якість частки, яку можна подрібнювати скільки завгодно і в будь-якому напрямку, дозволяє припустити, що це мозкова тканина.
Наявність волосся завжди є ознакою того, що об’єкт є часткою шкіри.

Після обробки оцтовою кислотою виявляють власний колір часток тканин: вони стають безбарвними, матовими, жовтуватими, бурими. Ці забарвлення є постійними ознаками, які можна використовувати для диференціювання типів і деяких основних видів тканин. З цією ж метою необхідно використовувати й інші ознаки, які виявляються при стереомикроскоп частинок під час їх препаровки.

Дослідження нефарбованих препаратів може дати додаткову інформацію про тип (вигляді) тканини досліджуваної частинки і про стан клітин. За ним можна вирішити питання про необхідність приготування препаратів з частини об’єкта.

У пофарбованих препаратах аналізують морфологічні ознаки тканини, клітин і іеклеточних структур. Ці ознаки, характерні для основних типів і деяких видів тканин, наведені в табл. 4. У ній вказані діагностичні ознаки, отримані при дослідженні об’єктів, з яких готували роздавлені препарати. Як видно з цієї таблиці, зазначені ознаки дозволяють досить чітко диференціювати тканини, причому більшість цих ознак може зберігатися в тканинах, які зазнали аутолітичних змін.

Comments are closed.