Апоптоз пухлинних клітин. Інкубація пухлинного матеріалу.

В останнє десятиліття в самостійну форму загибелі клітин виділений апоптоз. Його знаходять в пухлині як до, так н після лікування. Для апоптозу характерне ураження окремих клітин, відсутність запальної реакції в тканинах, швидкий фагоцитоз і перетравлювання загиблих клітин.). Зміни клітин при апоптозі полягають в маргііаціі хроматину і його розпаді на фрагменти, конденсації цитоплазми, поділі клітини на частини з відділенням останніх у вигляді апоптотіческіх тел. Вважають, що при апоптозі відбувається активація механізмів саморуйнування замість процесів дегенерації, як це відбувається при некрозі. Чинники, що викликають апоптоз клітин, і його механізми досліджуються, але встановлено, що радіація, гіпертермія та хіміотерапія пухлин прискорюють процес.

Лікувальні впливи змінюють гистофізіологиі пухлини, проліферацію (поділ), диференціювання та ріст клітин, їх з’єднання і переміщення, інтенсивність специфічного функціонування (якщо воно збереглося), здатність до клітинної та тканинної регенерації, чутливість до впливів зовнішнього середовища та ін

Проліферативна здатність клітин пухлини не тільки мішень для пошуку нових лікарських хіміотерапевтичних засобів і вдосконалення відомих методів лікування злоякісних новоутворень, але і достовірний безпосередній морфологічний критерій ефективності терапії, а також один з провідних показників ступеня патоморфозу.

Як відомо, з точки зору проліфератнвной здатності пухлинна і нормальна тканина складаються з двох субпопуляцій клітин проліферіруюшей (фракція зростання, проліферативний пул) і спочиває. Останню утворюють клітини, тимчасово виходять з клітинного циклу і зберігають здатність ділитися (фаза G0), а також непроліферуючі клітини. Іонізуюче випромінювання, особливо лікарські хіміотерапевтичні засоби, діє в основному на фракцію зростання, тобто на всі швидкозростаючі пухлини, в яких велика частина клітин перебуває в стані проліферації (наприклад, лейкози, лнмфосаркоми, хоріонепітеліома матки, саркома Юінга), є високочутливими до хнміотераневтіческім впливів і опроміненню.
пухлинні клітини

Численні дослідження клегочного циклу в пухлинах представляють інтерес з двох точок зору. По-перше, інформація про клітинному циклі необхідна для розуміння природи пухлинного росту. По-друге, з детальним знанням закономірностей клітинного розмноження в пухлинах пов’язана вироблення оптимальних схем променевої та хіміо терапії пухлин. Основним методом визначення параметрів клітинного циклу є аналіз зміни відсотка мічених мітозів після введення Н тіміднна. Радіоавтографія, як ніякий інший метод, «оживила» морфологію і сприяла перетворенню останньої із формально динамічною якою вона була досі в дійсно динамічну. Але, разом з тим серйозним недоліком радіоавтографін реєстрованої на рівні світлової мікроскопії, є те, що вона відносить центри інтенсивного синтезу речовини цілком до ядра або до цитоплазмі, а не до тих органел, в яких вони в дійсності здійснюються.

Крім того, сучасні технічні можливості обмежують використання методу в клініці через його тривалості, необхідності повторних біопсій і можливості шкідливої ​​дії іютопа на хворого. Незважаючи на обмеження методу, вдалося отримати дані про тривалість різних фаз клітинного циклу в деяких пухлинах людини. Велику практичну значимість придбав метод інкубації біопсійного та операційного матеріалу в середовищі з Н-тимідину in vitro, за допомогою якого визначають індекс мітки. рівний отіош (нію мічених клітин до загальної кількості клітин, помноженому на 100. Дані різних авторів для різних пухлин і навіть для різних ділянок одною і того ж новоутворення часто значно розходяться, що пов’язують багато в чому з похибками методу. Тож для отримання достовірних результатів, доводиться дослідити кілька шматочків тканини. Метод радіоавтографії in vitro успішно використовується для контролю лікування пухлин. Наведемо 2 приклади.

Мітотичний режим аденокарцином прямої кишки при різних методах передопераційного опромінення змінюється наступним чином. В неопромінених високодиференційованою аденокарциномі мітотичний індекс склав 25,6%, в помірно – 35,2%. Визначалося переважання метафаз (78,9% – в високодиференційованою і 70,2% – в помірно диференційованої аденокарциноми) над іншими фазами мнтоза, що є характерним для пухлин людини.

Патологічні мітози склали 29,3% в високодиференційованою і 23,2% в помірно диференційованої аденокарциноми (відставання хромосом в метафазі, розсіювання хромосом, тригрупові метафази та ін.)

Після опромінення відбувається достовірне зменшення рівня мітотичної активності та збільшення числа патологічних мітозів. У високодиференційованою аденокарциномі після опромінення дозою 20 Гр мітотичний індекс знижений до 15%, а відсоток патологічних мітозів збільшено до 86,7, в помірно диференційованої аденокарциноми – до 29,4% і 61,2% відповідно. При дозі 40 Гр мітотична активність в високодиференційованою аденокарциномі дорівнює 46% в помірно диференційованої – 7,2% 0, а відсоток патологічних мітозів збільшився відповідно до 91,3 і 100. Особливо різкі зміни проліфератівіой здатності клітин спостерігали при комбінації променевої та хіміотерапії.

Досліджено мітотичний режим раку гортані при променевому лікуванні із застосуванням радносенсібілізатора метроіідазола. Променеві зміни характеризувалися зменшенням чисельності клітинної популяції за рахунок некрозу і апоптозу, зниженням проліферативної пулу клітин, патологічними мітозами і пригніченням синтезу ДНК. 0,001″>Так, до лікування індекс мітки становив 6,05 ± 0,40 (неороговевающнй рак 7,33 ± 0,74, ороговевающий рак 5,0 ± 0,44), після лікування – 2,50 ± 0,46 (Р> 0,001 0,01; ороговевающий рак — 1,60 ±0,06; Р>0,001).”>) (неороговевающнй рак 3,24 ± 0,69, Р> 0,01; зроговілий рак – 1,60 ± 0,06; Р> 0,001). При порівнянні різних сумарних осередкових доз достовірних відмінностей велич індексу мітки ие зазначено (20 Гр – 2,70 ± 0,70; 32 Гр – 2,35 ± 0,66).

Необхідно зауважити, що достовірність результатів вимірювань у одного хворого (різні ділянки центру та периферії пухлини до і після променевої терапії) та групи хворих збігалися не завжди Наприклад, низький індекс мітки можна було зустріти в зроговілому раку до лікування і в обох гістологічних типах раку після лікування . Тому питання про значущість параметрів проліферації для оцінки радіочутливості пухлини не можна віднести до остаточного рішення.

Слід хоча б у стислій формі згадати про ефект синхронізації мітотичної активності пухлинних клітин, який був використаний в практиці променевої та хіміотерапії. Сутність ефекту полягає в тому, що за допомогою лікарського засобу (наприклад, 5-фторурацилу) клітини блокують на певній фазі клітинного циклу, а після відміни препарату всі вони синхронно переходять у наступну фазу циклу. Знаючи час проходження клітинами даного інтервалу, можна піддати пухлина опроміненню або поліхіміотерапії в одній з найбільш чутливих фаз циклу. Так, при комплексному лікуванні хворих на рак прямої кишки з використанням 5-фторурацилу в пухлині знаходили глибокі і розповсюджені пошкодження ракових клітин і пухлинних структур, аж до їх повного руйнування. Широке практичне використання ефекту синхронізації мітотичної активності пухлинних клітин ускладнено через необхідність тривалого (15-20 год) введення хворому) 5-фторурацилу, токсичності препарату, відсутність надійного контролю змін часових параметрів клітинного циклу і наявності в пухлині покояться клітин.

Comments are closed.